Design, purification et caractérisation du mutant à pont disulfure (MB-1LH) de la protéine de novo MB-1
Martin Williams
03-2224128

RÉSUMÉ

MB-1 est une protéine de novo ayant un pourcentage élevé (57%) en certains acides aminés essentiels qui sont limitants à une production optimale de lait et de protéines de lait, particullièrement chez les vaches en haute lactation. Cependant, des résultats obtenus pour la protéine MB-1 démontrent qu'elle n'est présentement pas suffisamment stable, au niveau conformationnel et protéolytique, pour suppléer à la déficience en ces acides aminés essentiels en nutrition animale. Des stratégies pour tenter d'améliorer la stabilité de MB-1 furent élaborées. Dans ce mémoire, le design, la création, la purification et la caractérisation d'une protéine dérivée de MB-1 (MB-1LH) sont discutés. La seule différence entre MB- 1 et MB-1lH est la présence d'un pont disulfure, entre l'hélice 1 et l'hélice 4 du carré d'hélices, dans la protéine mutée. En caractérisant le nouveau mutant, on peut voir que les mutations sont très déstabilisantes lorsque le pont disulfure est brisé. Cependant, lorsque le pont est intact, il réussit à compenser la déstabilisation due aux mutations et réussit même à augmenter la stabilité conformationelle et protéolytique de MB-1LH. L'impact de ces résultats au niveau de l'application de la protéine MB-1 et ses dérivés comme supplément en nutrition animale, ainsi qu'au niveau du contrôle de la topologie en design des protéines, est discuté.

31 mai 2001